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martes, 10 de mayo de 2016

MUTACIONES-INGENIERÍA GENÉTICA- genómica-proteómica-5/8



APLICACIONES DEL CONOCIMIENTO DE LA GENÉTICO

Genómica—conocimiento de la información genética (secuencia de nucleótidos) de un individuo o de una especie y de todos los procesos que llevan asociados (replicación, transcripcion, traducción, regulación)
Proteómica—se encarga de estudiar las proteínas que se generan a partir del material genético

INGENIERÍA GENÉTICA

El conocimiento de la genómica y la proteómica ha permitido el desarrollo de técnicas cuyos usos en los campos de la farmacia, medicina, agricultura, ganadería, medioambiente, industria, biominería, etc. son a día de hoy imprescindibles.
Desde el conocimiento del genoma se han desarrollado técnicas para la manipulación del ADN, que permiten manipular un organismo para conseguir que presente determinadas características. Para ello es necesario generar una molécula de ADN recombinante. Estos procesos, biotecnología, permiten la producción de determinadas sustancias o procesos a partir de los organismos modificados,

Para llegar a generar el ADN recombinante existen una serie de técnicas:




 vídeos: secuenciación ADN
            pasos clonación gen pasos clonación gen
            ADNc
                  Southern blot


1- Secuenciación ADN-  Proceso que permite conocer la secuencia de nucleótidos concreta de un fragmento de ADN o de todo el genoma de un organismo.

2-Formación ADN recombinante-  Tras seleccionar un fragmento de ADN de interés, se corta con enzimas de restricción (endonucleasas de restricción) que cortan la región de interés, dejando unos extremos que sobresalen (extremos cohesivos) que permiten insertar el ADN sin dificultad en el vector (que ha sido cortado con la misma enzima), también se pueden usar enzimas que generan fragmentos con extremos romos. La extracción del fragmento se realizará por electroforesis. Tras su inserción en el plásmido se requiere la ligasa para unir los puntos de inserción.

3-Síntesis ADNc- síntesis de ADNc (ADN complementario) que se obtiene al realizar la síntesis de ADN a partir de un ARNm mediante la transcriptasa inversa. En el caso de eucariotas, sta nueva cadena será distinta ya que no llevará intrones al ser copia de un ARN de secuencia madura.

4-Síntesis ADNnovo- cadena de de ADN creada de modo artificial  por un sintetizador que va añadiendo nucleotidos.


5-Hibridación ácidos nucleicos- técnica que permite la unión entre cadenas de ADN-ADN- técnica de Southern, ADN-ARN técnica Northern, proteína-anticuerpo técnica Western. Todas estas técnicas permiten localizar un determinado fragmento de ADN, ARN o proteína en un organismo o célula (ejem. anticuerpos, secuencias de ácidos nucléicos, etc.).



 vídeo: PCR , PCR



6-Genotecas ADN- se aísla una secuencia de ADN con un gen de interés y se inserta en un plásmido y posteriormente en una bacteria en la que queda almacenado.


7-PCR- reacción en cadena de la polimerasa. Proceso que permite generar multiples copias de una secuencia determinada de ADN (proceso de amplificación del ADN). En el proceso se requiere desnaturalizar el ADN, una vez abierto se copia (inserción de nucleótidos), se generan 2 dobles hélices, en una segunda ronda se vuelve a abrir las cadenas, que de nuevo sirven de molde para las nuevas copias. Estos sucesivos procesos de desnaturalizacion se llevan a cabo con incrementos de temperatura, por lo que se requiere un ADNpolimerasa que resista estas temperaturas (Taqpolimerasa, polimerasa procedente de una bacteria extremofila: Thermus aquaticus), además hacen falta la primasa para insertar el cebador, y nucleótidos trifosfato.

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